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·

 论著 

·

Doxycycline诱导表达Msx2

-

GFP的鼠晶状体上皮Alpha

-

TN4

细胞株的建立

张娇，

于紫燕，

赵江月

（

中国医科大学附属第四医院眼科，

中国医科大学眼科医院，

辽宁省晶状体学重点实验室，

沈阳  110005

）

摘要 

目的

利用基因开关调节系统

（

Tet

-

on

）

，

拟建立由

doxycycline

调控表达的

Msx2

诱导细胞株

，

经与

SWISS

-

2DPAGE DATA

比

对

，

发现差异蛋白点

。

方法

向鼠晶状体上皮细胞

（

Alpha

-

TN4

）

中稳定转染质粒

Msx2

-

GFP

-

M2

和

TAP

-

GFP

-

M2，

转染后的细胞经过

G418

筛选

，

挑出

doxycycline

诱导

Msx2

-

GFP

表达且具有较低背景的诱导细胞株

M8，

将空载体细胞株

T9

作为阴性对照细胞株

。

并对

2

组细胞行二维凝胶电泳

（

2

-

DE

）

及基因表达微阵列进行分析

。

结果

从二维凝胶电泳图谱上获得蛋白质斑点

。

对照组

T9

检测到

5 389

个斑点

，

实验组

M8

检测到

 5 460

个斑点

。

经与

SWISS

-

2DPAGE DATA

比对

，

发现差异蛋白点

。

经基因表达微阵列分析发现

，

与

晶状体及白内障疾病相关的差异基因为

Col3

α

1

，

并在

RNA

水平进行了验证

。

结论

Msx2

基因过表达对

Alpha

-

TN4

蛋白质表达谱

有影响

，

其中差异基因

Col3

α

1

与晶状体及白内障疾病相关

。

关键词 

Msx2；

 Col3

α

1；

 Tet

-

on

系统

；

晶状体上皮细胞

；

诱导细胞株

中图分类号

    R776.4 

文献标志码

    A 

文章编号

    0258-4646 

（

2019

）

 06-0499-03

网络出版地址

    http://kns.cnki.net/kcms/detail/21.1227.R.20190524.1324.012.html   

DOI：

10.12007/j.issn.0258

‐

4646.2019.06.005

Establishment of Alpha

-

TN4 Cell Line Expressing Msx2

-

GFP Induced by Doxycycline

ZHANG Jiao，

YU Ziyan，

ZHAO Jiangyue 

（

Department of Ophthalmology，

The Fourth Affiliated Hospital，

The Eye Hospital，

China Medical University，

Lens Science Research Key Laboratory of 

Liaoning Province，

Shenyang 110005，

China

）

Abstract 

Objective 

To establish an Msx2

-

induced cell line regulated by doxycycline using gene switch regulatory system 

（

Tet

-

on

）

and identify differentially expressed protein spots by comparison with SWISS

-

2DPAGE data. 

Methods

The cells were transfected into 

Alpha

-

TN4 cells by stable transfection of plasmid Msx2

-

GFP

-

M2 to yield TAP

-

GFP

-

M2. G418 screening identified an Alpha

-

TN4 cell line 

expressing doxycyclin

-

induced Msx2

-

GFP. The cell line M8 with a lower background and the empty vector cell line T9 were used as neg-

ative control cell lines. These two groups of cells were analyzed by two

-

dimensional gel electrophoresis 

（

2

-

DE

）

 and microarray assay. 

Re-

sults

The following protein spots were obtained from 2

-

DE：

5 389 protein spots were detected in the T9 control group and 5 460 protein 

spots in the M8 experimental group. The protein spots were identified by comparison with SWISS

-

2DPAGE database. The microarray assay 

identified 

Col3

α

1

 as the differentially expressed gene associated with lens and cataract diseases. The findings were verified at the RNA 

level. 

Conclusion

The overexpression of the 

Msx2

 gene has an effect on Alpha

-

TN4 protein expression profile. Additionally，

Col3

α

1 

is 

associated with lens and cataract diseases.

Keywords 

Msx2；

 Col3

α

1；

 Tet

-

on system；

 lens epithelial cells；

 induced cell lines

肌节同源盒基因同系物2 

（

msh homobox 2

，

 Msx2

）

作为肌节同源框基因家族的一员，

其编码的转录抑

制蛋白可调控细胞的存活与凋亡

［

1

］

。

它多表达在间

充质细胞与上皮细胞的交界处以及细胞增殖的区

域，

在体内控制着细胞的增殖和分化，

与心血管、

骨

骼、

眼耳鼻等组织发育密切相关，

Msx2的表达异常

或突变会对机体产生不良影响

［

2

-

3

］

。

在眼发育学研究领域，

国外有研究

［

4

］

结果显示，

在

Msx2

转基因鼠中发现小眼球畸形及视网膜发育

缺陷。

先前的研究

［

5

］

中也发现

Msx2

表达异常，

通过

抑制

FoxE3

基因并上调

Prox1

的表达来调控晶状体的

发育。

同时，

敲除

Msx2

基因可通过激活Casp3/Casp8 

凋亡信号通路，

引起晶状体组织中凋亡增加

［

6

］

。

晶

状体细胞凋亡是导致白内障发生的机制之一，

因

基金项目

：

国家自然科学基金 

（

81371003

）

作者简介

：

张娇 

（

1993-

）

，

女，

硕士研究生.

通信作者

：

赵江月，

E-mail：

zhaojiangyue@hotmail.com

收稿日期

：

2018-12-24

网络出版时间

：

2019-05-24 17:35

中国医科大学学报 

第48卷 

第6期 

2019年6月

Journal of China Medical University 

Vol.48 

No.6 

Jun. 2019