小动物活体成像常见问题及分析

1.

荧光素酶的发光是否需要激发光？底物荧光素

(Luciferin) 

是如何进入小鼠体

内的？需要多少？

荧光素酶的发光是生物发光，不需要激发光，但需要底物荧光素

(D-

Luciferin)

。

荧光素酶有

554

个氨基酸，

约

50KD

。

荧光素酶的底物荧光素，

约

280

道尔顿。

荧光素的水溶性和脂溶性都非常好，

很容易穿透细胞膜和血脑屏障。

荧

光素是腹腔注射或尾部静脉注射进入小鼠体内的，

约一分钟就可以扩散到小鼠全

身。

大部分发表的文章中，

荧光素的浓度是

150mg/kg

。

20

克的小鼠需要

3

毫克

的荧光素。

常用方法是腹腔注射，

这种方法扩散较慢、

开始发光慢、

持续发光长。

若进行荧光素静脉注射，这种方法扩散快、开始发光快，但发光持续时间很短。

2.

有几种常用的荧光素酶？特性如何？

常用的有两种荧光素酶，

Luciferase 

和

Renilla 

荧光素酶，二者的底物不

一样，

前者的底物是

D-luciferin

，

后者的底物是

coelentarizine 

。

二者的发光颜

色不一样，前者所

发的光波长在

540-600nm

，后者所发的光波长在

460-540nm 

左右。前者所发

的光更容易透过组织，

后者在体内的代谢比前者快。

大部分的发表文章通常使用

前者用作报告基因，

也有一些文章使用两者进行双标记。

3.

能标记病毒吗？能标记病毒的某一个基因吗？

可以标记病毒，

由于病毒在核酸结构上的特性，

每个病毒标记的方法不一样，

具

体的可以参见有关文献。还没有看到标记病毒某一个基因的报道，但理论上讲，

将荧光素酶基因与想标记的基因平行表达，

可以标记任何基因。

交通大学的专家

已经标记了腺病毒、腺相关病毒进行了基因治疗方面的活体成像实验。