基本原理
LCR ，即在D N A 连接酶的作用下，通过连接与模板D N A互面红章补的两个相邻寡核苷酸链，快速进行D N A 片段扩增。D N A连接酶可将与模板D N A 链互补的两条毗邻寡核苷酸片段连接起来，两条寡核苷酸链责缺难跑脚求看吧士接头处存在碱基错配则阻止连接反应的发生。所以通过连接酶反应研度东做双排危知志至搞，可明确区分寡聚项便执细读植速核苷酸是否与模板D N A 完全互补，检测基因点突变。耐热D N A 连接酶在不同温度组成的循环中活性保持不变。这样，在适当的缓冲体系中加入模板D N A 。一套寡聚核苷酸片段，耐热D N A 连接酶，终林死茶信所末吃门尼稳将上述反应体系加热，使模板D N A 在高温下（94 ℃）一分钟变性，解链；然后将反应体系降至退火温度（65 ℃），4 分钟使模板寡聚核苷酸互补成双链；D N A 连接酶催化两相邻的寡核苷酸连接起来。如此循环改变温度，连接反应重复进行，使目的D N A 得到扩增。如果两来自寡核苷酸接头处存在错配碱基，则没有扩增产物的产生，扩增产物可通过聚丙烯酰胺电泳加360问答以鉴定。

发展过程
连接酶链反应(Ligase chain reaction，LCR)，是Backman1997年为检出靶基因序列中的点突变而设计升蒸分减玉发明，并申报了专利.1988年Landegren也进行了该项研究。198老搞增脚皮攻介川英冷破8年Backma部手连座科确n等又因分离热稳定的连接酶，而申报专利，1991年Backman和Ba护威还斤入滑全列还rany分别用耐热DNA连接酶进行了LCR试验。耐热DNA连接酶可以在热循环中保持活性，提高连接反应的特异性，排除了背景扩增和免除了不断补充酶的繁琐程序。合成一对引物A、B，它们完成覆盖了靶序列。经退火与靶序列结合后，A、B间留下一个缺口(nick)，加入连接酶封闭缺口，两引物成靶序列完整的互补链。如果靶序列中有点突变，引物不能与靶序列精确结合，缺口附近核苷酸的空间结构发生变化，连接反应不能进行，变性后引物仍是两个。Lan-degren用生物素标记引物A，用3迅海思律么但主创2P标记引物B。用洋材亲和素包被的琼脂糖珠与连接产物反应，检测其放射性。显然，当靶序列中存在点突变时，检测结果赶否春部是阴性的。用这种方式，Landegren将人β-珠蛋白βA、βC、βS三个等位基因区别开来。Wu等人又引入P知兰事百步对去奏善四CR的原理，在连接反应后，变性、退火、再连接，少量的靶序列就被扩增出来。Barany谈火校装合钢投于1991年报道了耐热连接酶-Taq连接酶的发现及其在LCR中的应用，为LCR的实用化奠定了基础。实际操作时引物为4个，A、 怕困比A’和B、B’，分别与靶序列的正负链互补。每次连接反应的产物又可在下一轮反应中当模板，靶序列以指数形老律地度减确感纸式扩增出来。用上面提到的标记检测方法，即可检测靶序列中有无点突变。
完矛居级查LCR的特异性首先取决于引物与模板的特异结合，其次Taq连接酶作用的特异性，即T预社洋示联胶李弱aq连接酶是否仅连接与靶序列完全互补的引物。实验表明Taq连接酶的非特异活性是较低的(<1%)。控制模板、酶的浓度，使反应在接近Taq酶的温度下进行，还可进一步降低非特异连接率。Barany用这一技术，将极少量(<200个分子)的βA、βC和βS区别开来。
LCR的扩增效率与PCR相当。由于有很高的信噪比，其敏感性也很高。用Taq连接酶做LCR只在两个保温点的循环(94℃、1min和65℃、4min)。产物检测也非常方便、敏感。因此可以说LCR是目前检测已知序列中有无点突变的最佳方法。