人血型A抗原模拟多肽Fas融合基因-Mip3B双表达质粒的构建和鉴定.pdf

双表达质粒的构建及鉴定 硕士研究生：邹建军 指导教师：张积仁教授 摘 要 背景 据世界卫生组织最新资料，全世界大约有癌症病人1400万，每年约有200 万新发癌症患者，死亡500万，每死亡10个人中就有一个死于癌症。恶性肿 瘤是人类三大死因之一，仅次于心脑血管病和意外事故。在发达国家中占各类 死亡原因的第1或第2位。而肿瘤的发病一直呈上升趋势，美国NCI权威机构公 布，美国近20年间癌症的死亡率从16％增长到23％。专家预测，由于人口老龄 化、吸烟、生活方式城市化及工业化进程等多种原因，在今后的二三十年内肿瘤 的发病及死亡率仍将继续呈上升趋势。当然，肿瘤发生是一个极其复杂的过程。 以往的肿瘤研究往往着重于肿瘤细胞自身，试图从癌细胞本身基因与表型改 变来解释肿瘤的发生及进展。随着基因、分子生物学技术的进展，人们发现， 肿瘤的形成和进展不单只与肿瘤细胞本身有关，也与肿瘤微环境有关。肿瘤微 环境是肿瘤细胞在其发生发展过程中所处的内环境，由肿瘤细胞本身、间质细 胞、微血管、组织液及少量浸润细胞，如树突状细胞、巨噬细胞等共同组成。 微环境与肿瘤细胞之间关系复杂，它们相互作用，并反映、改变甚至逆转了肿瘤 生物学特性，对肿瘤表观遗传学、干细胞、免疫逃逸、转移潜能等产生重要的影 响。浸润在肿瘤微环境中的免疫细胞，其抗肿瘤效应的下降有利于恶性肿瘤的 进展、新生血管的形成及向远处的转移。如何打破肿瘤微环境的抑制状况，是 中文摘要 肿瘤治疗一重要途径。 长期以来，肿瘤的治疗多采用手术，放疗和化疗三大常规方法。在一百多 年前，Caley用细菌疫苗免疫机体时，就观察到肿瘤会缩小。随后人们逐渐认识 到肿瘤细胞可以激发机体产生免疫反应，而免疫系统本身对肿瘤也具有监视作 用。机体抗肿瘤免疫由先天性免疫(非肿瘤特异性免疫)和获得性免疫(肿瘤 特异性免疫)组成，二者共同参与机体免疫监视和抗肿瘤效应。随着人们对基 础免疫研究的深入，对免疫系统针对肿瘤的识别和肿瘤逃避免疫监视等的机制 有了更深的理解。肿瘤细胞作为抗原引起机体免疫反应通常需要两个步骤，第 一步是抗原提呈细胞(antigenpresentingcells，APCs)摄取并加工肿瘤抗原以 MHC．I肽或MHC．II肽提呈给CD8或CIMT淋巴细胞。第二步是APCs表达高水平 的共刺激分子(B7．1、ICAM．1、LFA．1等)与抗原特异性T淋巴细胞表面的受体 免疫监控和肿瘤抗原的表达原理，肿瘤在恶变和转移过程中理论上应引起免疫 反应，抑制肿瘤的生长。也正是根据免疫系统对肿瘤有抑制作用，肿瘤的免疫 治疗越来越受到重视。细胞过继免疫治疗曾被认为是最有前景的免疫治疗法，该 方法是将患者的免疫细胞进行体外培养，加入肿瘤特异性抗原和细胞因子刺激， 筛选出具有高度特异性肿瘤杀伤效应的免疫细胞并进行大量扩增，然后再回输到 患者体内以杀灭肿瘤。由于此方法克服了人体内肿瘤免疫耐受中肿瘤抗原呈递 效率低下和效应性淋巴细胞不足的两个关键问题，通过此方法，在体外研究中，得 到了较好的肿瘤杀伤效应，但体内应用效果却远逊于体外，并不能得到显著的免 疫杀伤效应。因为肿瘤细胞不仅被动的逃避免疫系统的攻击，同时也主动的抑 制其生长环境中的免疫细胞的正常功能。最近研究表明，肿瘤微环境内的免疫耐 正受是导致这种情况发生的最关键原因。肿瘤微环境内可以导致肿瘤局部免疫 耐受发生的因素有多种，机制也不一样，大致有以下几种：局部效应细胞功能障 碍、抑制性免疫调节细胞Treg、细胞因子的免疫负调节作用、抑制性配体受体反 应以及肿瘤微环境中T细胞代谢活性的负调节等。 Ⅱ 一 硕士学位论文 由于肿瘤微环境处于免疫抑制状态，免疫系统不能有效呈递肿瘤抗原，因此 针对肿瘤的特异性免疫过程无法启动，也就无法激活免疫效应细胞。正是因为这 种情况，重建体内的免疫反应过程，促使特异性识别肿瘤细胞抗原的T细胞增殖与 分化，是肿瘤免疫治疗的核心。在肿瘤的免疫治疗中，肿瘤疫苗的研究越来越多， 其设计策略的思路是应用各种技术，增强免疫系统对肿瘤抗原的识别能力，改 善免疫微环境，引发有力的特异性抗肿瘤细胞免疫，阻止肿瘤进展，最终消除 肿瘤。目前人们尝试在基因水平