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石蜡切片的制作 石蜡切片的制作 生物秀—专心做生物！ 生物秀 — 专心做生物！ 生物秀论坛-学术交流,资源共享,互助社区 生物秀论坛 - 学术交流 , 资源共享 , 互助社区 /bbs/ /bbs / 石蜡切片的过程 v 动物的处死 v 动物组织取材 v 固定 v 组织固定后的处理 v 脱水和透明 v 包埋 v 切片 一、动物的处死 v 麻醉 v 空气栓塞 v 颈椎脱臼或断头 v 股动脉放血 二、动物组织取材 v 动物组织取材原则： 尽量保持组织的生活状 态。 v 动作要快 v 不要过度用力夹捏组 织，防止组织变形。 三、固定 v  1、目的： 尽量保持组织的生前状态，防止组织的死后变 化、自溶。 保持细胞和组织原有的形态结构， 保持组织内部成分特征不发生变化。 v  2、方式：浸入式 灌注式 灌注式 v 此法适用于动物实验研究。自左心室插入主 动脉，先以生理盐水冲冼血液后，以泵、吊 筒或50­100ml注射器注入固定液。然后取 材，投入固定液。 v 灌注法固定可使固定液迅速达到全身各组 织。达到充分固定之目的。 3、固定液 v 醛类固定剂 v 非醛类固定剂 v 丙酮及醇类固定剂 醛类固定剂 v 双功能交联剂，其作用是使组织之间相互交 联。 v 包括：甲醛、多聚甲醛、戊二醛 v 通常与其他的试剂联合使用 v 优点是对组织穿透性强，收缩性小。可以保存 蛋白质、脂肪、黏液物质以及一定量的糖原。 v 缺点：长期固定使组织过度硬化及细胞核不着 色，并且产生“福尔马林色素”，它是由于血红 蛋白与甲醛转化的酸形成正铁血红素。 非醛类固定剂 v 氯化汞（HgCI ）：蛋白的强固定剂 2  v 重铬酸钾：保存类脂、高尔基复合体、及染色体等结 构。 v 苦味酸：三硝基苯酚，蛋白、糖原固定剂， v 醋酸：固定染色体。软化组织，缓解收缩。 v 蔗糖：防止某些细胞成分扩散，保持酶活性，良好形态。 v 四氧化锇：保存细胞蛋白质细微结构有良好效应，应用与 电镜观察切片的固定与染色。 丙酮及醇类固定剂 v 丙酮：沉淀蛋白质和糖，对组织穿透性很强。可以 单独使用，低温下保持酶活性效果好。 v 乙醇：固定糖原和核酸的作用。低分子蛋白质、多 肽及胞浆内蛋白质保存效果较差。必须与其他试剂 混合使用，单独使用使组织收缩严重，对细胞形态 保存不良。 混合固定剂 v 固定组织时，单独使用一种固定剂很难对组 织成分有理想的固定效果。通常几种固定剂 混用，制成混合固定剂。以求得补偿某试剂 对组织所致的缺陷。 v 4%多聚甲醛磷酸缓冲液  pH7.4  v 成分： 4%多聚甲醛溶于1倍的磷酸缓冲液中， v  1倍的磷酸缓冲液:PBS  MV  v  NaCl  140mM