一、乾思关于菊头蝠皮肤细胞细胞株的声明

菊头蝠皮肤细胞 。上海乾思生物公司细胞近3000种，来源于美国ATCC,细胞都是经过严格质量控制，在大陆努力搭建正牌细胞与国内广大科研人员之间的沟通桥梁。为您菊头蝠皮肤细胞外，还有更多相关实验产品，标准品，细胞株和实验技术服务等等前期后续服务。

  市面上的菊头蝠皮肤细胞“李鬼”细胞荼毒科研，科学家指出被污染细胞系使生物医学遭受严重损失，细胞的身份至关重要。

二、购买上海乾思生物菊头蝠皮肤细胞注意事项--（乾思生物）发布

2.1 客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；

收到菊头蝠皮肤细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。

2.2 如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心5分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。

  注意：换液时一半用我们的培养基，一半用你们的，以免细胞不适应而造成生长不好。

2.3 细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？

  （1）细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、破损、漏液等，重发；

  （2）冻存的细胞复苏后，绝大多数细胞未存活，重发；

  （3）存活的细胞静置24小时后，绝大多数细胞未存活，重发；

  （4）冻存的细胞复苏后或存活的细胞静置4小时后并且未开封，出现污染，重发；

  （5）视具体情况而定。

2.4 细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？

  （1）客户造成细胞污染，不重发；

  （2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；

  （3）细胞状态不好，未细胞培养前3天照片的，不重发；

  （4）细胞培养时经其它处理的，不重发；

  （5）细胞收到2天内，未告知，不重发；

  （6）视具体情况而定。

三、菊头蝠皮肤细胞细胞培养常遇到的问题都在这了

养细胞是一件戳心戳肺的事。你要像照顾小孩一样仔细对待，爱护她，呵护她。下面我们就来讲讲细胞培养常见问题的原因及对策。

1 培养液 pH 值变化太快

>>>>原因

CO2 张力不对

培养瓶盖拧得太紧

NaHCO3 缓冲系统缓冲力不足

培养液中盐浓度不正确

细菌、酵母或真菌污染

>>>>对策

按培养液中 NaHCO3 浓度增加或减少培养箱内 CO2 浓度，2.0 g/L 到 3.7 g/L 浓度 NaHCO3 对应 CO2 浓度为 5％ 到 10％。或者改用不依赖 CO2 培养液

松开瓶盖 1/4 圈

加 HEPES 缓冲液至 10 到 25 mM 终浓度

在 CO2 培养环境中改用基于 Earle’s 盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用 Hank’s 盐配制的培养液

丢弃培养物或用抗生素除菌

2 培养液出现沉淀，pH 值不变

>>>>原因

用洗涤剂清洗后残留磷酸盐将培养基成分沉淀下来

冰冻保存培养液

>>>>对策

用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后除菌

将培养液加热到 37 ℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，丢弃培养液

3 培养液出现沉淀，同时 pH 发生变化

>>>>原因

细菌或真菌污染

>>>>对策

丢弃培养物或用抗生素除菌

4 培养细胞不贴壁

>>>>原因

胰蛋白酶消化过度

支原体污染

培养液中无贴壁因子

>>>>对策

缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度

分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物

改变培养液成分

5 悬浮细胞成簇

>>>>原因

培养液中含钙、镁离子

支原体污染

蛋白酶过度消化使得细胞裂解释放 DNA

>>>>对策

用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液

分离培养物，检测支原体。如发现支原体污染，丢弃培养物

用 DNase I 处理细胞

6 原代细胞培养物污染

>>>>原因

原代培养组织在进入培养前已污染

>>>>对策

培养前用含高浓度抗生素的平衡盐溶液反复冲洗组织培养前用含高浓度抗生素的平衡盐溶液反复冲洗组织

7 培养细胞死亡

>>>>原因

培养箱内无 CO2

培养箱内温度波动太大

细胞冻存或复苏过程中损伤

培养液渗透压不正确

培养液种有毒代谢产物堆积

>>>>对策

检测培养箱内 CO2

检查培养箱内温度

取新的保存细胞种

检测培养液渗透压。注意：大多数哺乳动物细胞能耐受渗透压为 260~350 mOsm/kg。加入额外试剂如 HEPES 或药物都有可能影响培养液渗透压。

换入新鲜培养液

8 培养细胞生长减慢

>>>>原因

由于更换不同培养液或血清

培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏

培养物中有少量细菌或真菌污染

试剂保存不当

接种细胞起始浓度太低，细胞已老化

支原体污染

>>>>对策

 比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验。让细胞逐渐适应新培养液

换入新鲜配制培养液。补加谷氨酰胺或生长因子

用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物。或用抗生素除菌

血清需保存在 -5 ℃ 到 -20 ℃。培养液需在 2~8 ℃ 避光保存。含血清完全培养液在 2~8 ℃ 保存，并在 2 周内用完

增加接种细胞起始浓度，换用新的保种细胞

分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物

9 保存血清好的方法是？

建议血清应保存在 -5 ℃ 至 -2O ℃。然而，若存放于 4 ℃ 时，请勿过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

10 如何解冻血清不会使其质量受损？

建议将血清从冷冻箱取出后，先置于 2～8 ℃ 冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。

11 血清解冻后有絮状沉淀物怎么办？

血清中沉淀物的出现有许多种原因，但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白（形成凝血的蛋白）在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因。

但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。若欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以 400 g 稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。

12 为什么要热灭活血清？

加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养 ES 细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，使用热灭活血清。

13 有必要做热灭活吗？

实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。

而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是「小黑点」，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在 37 ℃ 环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。

14 储存冰箱中的胎牛血清出现沉淀？

GIBICO 的胎牛血清没有预老化，储存在 2~8 ℃ 时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。在 -20 ℃ 储存胎牛血清，避免反复冻融。

15 如何避免沉淀物的产生？

解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法（-20 ℃ 至 4 ℃ 至室温），若血清解冻时改变的温度太大（如 -20 ℃ 至 37 ℃），实验显示非常容易产生沉淀物。

解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。

请勿将血清置于 37 ℃ 太久。若在 37 ℃ 放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。

血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。若必须做血清的热灭活，请遵守 56 ℃，30 分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。

关于细胞培养还有很多问题需要解答，怎么办？

欢迎咨询，为你排忧解难！

四、菊头蝠皮肤细胞售后服务政策

  Acris、 abcam、cst、Biorbyt、santa、Novus、sigma、lifespan、NEB、roche、ABI、R&D millipore、BD、Qiagen Cayman、Jackson Life、GeneTex、Bio-Rad DSHB、tocris、peprotech 等；部分产品现货，低比价，另常备、Trizol、DMSO、lipo2000、lipo3000、SC-2004、SC-2005常备现货 ；货期短，价格优，售后齐全。

  菊头蝠皮肤细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果；细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，我们调查核实后予免费调换，不收取任何费用。

  需要客户菊头蝠皮肤细胞细胞培养说明、细胞操作处理方法、细胞质量问题反馈表。

  如用户收到细胞8-30天之内，因处理不当造成细胞死亡或污染，我公司将优惠价重新一株原细胞

  菊头蝠皮肤细胞质量可靠，售后有保障

  我库细胞近3000种，来源于美国ATCC,细胞都是经过严格质量控制。

  冻存细胞时间为5-7个工作日，活细胞为7-15个工作日。

  由于细胞库现有细胞类目多，为了不出现混乱错误，需要了解菊头蝠皮肤细胞相关细胞价格及详细资料请老师告诉我们，对您造成的不便还请见谅！

  （BY WHY）