一

目的基因的获得

细菌基因组

DNA

的提取

（一）仪器

1

）台式高速离心机

2

）恒温水浴箱

3

）枪式移液器

4

）灭菌的

EP

管和

Tip

头

（二）试剂

1

）溶液

1: 25%                 

蔗糖

          50

mmol/L 

Tris-Hcl

，

pH

8.0 

          50

mmol/L 

EDTA

，

pH

8.0 

          500

ug/ml 

溶菌酶（现用现配）

100ug/ml 

RNase 

2)

溶液Ⅱ：

100mmol/L 

Tris-Hcl

，

pH

8.0 

1% 

SDS 

400ug/ml 

蛋白酶

K 

3

）酚：氯仿：异戊醇（

25

：

24

：

1

）

4

）氯仿：异戊醇（

24

：

1

）

5

）

3mol/L 

NaAc(pH5.2) 

6

）异丙醇或无水乙醇

7

）

70%

乙醇

8) 

TE

缓冲液：

10mmol/L 

Tris-Hcl

，

pH

8.0 

1mmol/L 

EDTA

，

pH

8.0 

(

三

)

实验步骤

1) 5

mL

细菌过夜培养，

5000

rpm

离心

10

分钟，去上清液。

2

）将菌体细胞悬于

250

uL

溶液

1

中，

37

°

C

水浴保温过夜。

3

）加

250

uL

溶液Ⅱ，

55

°

C

水浴保温

4

小时。

4

）加

0.9

倍体积的酚

/

氯仿

/

异戊醇（

25

：

24

：

1

）

，轻轻混匀，于

14000

rpm

离心

10

分钟，转

移水相至新的

Ep

管，重复步骤

4

一次。

5

）向转移的水相中加入

0,9

倍体积的氯仿

/

异戊醇（

24

：

1

）

，轻轻混匀，于

14000

rpm

离心

10