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Dual-Luciferase ? Reporter Assay
试剂准备
Luciferase Assay Buffer II 10ml
Luciferase Assay Substrate 1vial
Stop Glo ? Buffer 10ml
Stop Glo ? Substrate, 50X 200ul
Passive Lysis Buffer (PLB), 5X 30ml
0
2
1. 1X PLB: 加 1体积的 5X Passive Lysis Buffer (PLB) 到4体积的 dH0中，4 C
保存（一个月）。
2. LARII ：将Luciferase Assay Substrate 重悬于 10ml Luciferase Assay Buffer
0 0
II 中（-20 C保存 1个月， -70 C保存 1年）。
3. 1X Stop Glo 试剂： 1体积 50X Stop Glo ? Substrate 加入 49体积的 Stop
0
Glo ? Buffer 中（-20 C保存 15天）。（每次试验需要 100ul ）
细胞处理
1. 吸除细胞培养液
2. 1X PBS轻柔的冲洗细胞
3. 加入 1X PLB （推荐用量）
4. 细胞溶解
室温条件下，轻摇细胞 15min，
- 可编辑修改 -
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- 可编辑修改 -
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瞬时转染和报告基因实验
采用脂质体介导技术转染。重组质粒分别为 p-629/+100 ， p-401/+100 ，
p-238/+100 ，p-80/+100 ，p-25/+100 。pGL3- basic 为阴性对照 ; 同时以转染
phRL-tk( 海肾荧光素酶 ) 作内对照 。具体转染方法参照转染 (Polifectamine
Reaent) 说明书进行。
1. 将质粒 DNA(3.2 μg) 与 phRL-tk (0.8 μg) 按 1:4 混合后为 A 液，混匀 30s，
PolyFect(QIAGEN) 与无血清无抗生素的 DMEM按 1:50 混匀后为 B液，混匀 30s;
2. A+B 混匀 (B 加入 A)15s ，室温下孵育 5-10 min;
3. 吸出六孔板中的培养液，用无血清无抗生素的 DMEM洗 3 遍，然后加入 AB混
合液，每孔 0.8mL;
4. 6h 后，加入 2mL完全 DMEM;
5. 24h 后，倒出旧培养液，换为完全 DMEM;
2 2 2
6. 100 μg HO 或 B(a)P 处理 lh 或 24h; （200 μMMMS，24h
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