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16sRNA测序相关实验步骤和方法已有5人参与
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本人最近筛选出一个单菌落，需要用到16sRNA测序，但之前没有接触过此类实验，不知如何操作，希望大神能指点一二。 @天使托 发自小木虫Android客户端 |
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happy6
木虫 (著名写手)
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- 专业: 水产生物遗传育种学
2楼2016-05-03 13:15:10
【答案】应助回帖
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这是我们实验室鉴定菌种所用测序的方法，你可以参考一下。 ITS序列扩增与TEF-1α序列扩增 将模板DNA分别进行ITS序列与TEF-1α序列的扩增。引物序列见下表3： 表3 引物序列 Primer 5’- 3’ ITS1 TCCGTAGGTGAACCTGCGG ITS4 TCCTCCGCTTATTGATATGC Ef728M CATCGAGAAGTTCGAGAAGG Tef1αR GCCATCCTTGGGAGATACCAGC ITS序列PCR反应体系： 10xBuffer 2.5μL Mg2+ 2μL ITS1 1.5μL ITS4 1.5μL dNTP 2μL Taq 0.5μL 模板 1μL ddH2O 14μL Total 25μL ITS序列PCR程序： 94℃ 5min 94℃ 30s 50℃ 30s 72℃ 60s 72℃ 10min 4℃ ∞ TEF-1α序列PCR反应体系： 10xBuffer 2.5μL Mg2+ 2μL Ef728M 1.5μL Tef1R 1.5μL dNTP 2μL Taq 0.5μL 模板 1μL ddH2O 14μL Total 25μL TEF-1α序列PCR程序： 94℃ 5min 94℃ 45s 52℃ 45s 72℃ 60s 72℃ 10min 4℃ ∞ PCR产物直接送去测序。 |
3楼2016-05-04 11:32:49
4楼2016-05-04 23:56:30
5楼2016-05-11 00:15:59
fang8232335
银虫 (初入文坛)
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- 性别: GG
- 专业: 分子与进化生态学
6楼2016-05-11 13:51:18
7楼2016-05-12 08:31:35
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silicare: 金币-200, 屏蔽内容, 违规存档, 再发这种毫无价值千篇一律的纯广告帖子，就只能封号了 2016-05-25 11:37:13
silicare: 金币-200, 屏蔽内容, 违规存档, 再发这种毫无价值千篇一律的纯广告帖子，就只能封号了 2016-05-25 11:37:13
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8楼2016-05-17 09:57:17
9楼2017-05-25 15:27:40
5